تعليمات بروتوكول زراعة الأنسجة لنخيل التمر
زراعة الأنسجة لنخيل التمر هي طريقة تستخدم لتكثير الخلايا غير الجنسية للنبات، لإنتاج شتلات نخيل التمر المثمرة على نطاق واسع. سيتم التطرق في هذا النص بشكل مختصر إلى تعليمات زراعة الأنسجة لنخيل التمر. تُعد شتلات نخيل التمر من نوع مجول وبرحي الأكثر طلبًا والأغلى سعرًا في العالم.
لفهم أفضل لأهمية إنتاج نخيل التمر باستخدام تقنية زراعة الأنسجة، يُفضل أولاً قراءة موضوع إنتاج شتلات نخيل التمر بعناية لاستعراض جميع الطرق المتاحة لإنتاج هذه الشجرة الاستوائية القيمة. هناك طريقتان رئيسيتان لإنتاج شتلات نخيل التمر باستخدام تقنية زراعة الأنسجة والتكاثر الدقيق:
- Organogenesis
- Direct Somatic Embryogenesis
إنتاج شتلات نخيل التمر باستخدام تقنية زراعة الأنسجة
تشمل مراحل زراعة الأنسجة لنخيل التمر في المختبر ما يلي:
المرحلة الأولى: تحضير العينة الصغيرة Preparation
العينة الصغيرة أو المادة الوراثية هي في الواقع نفس الخلايا غير الجنسية الأولية التي تؤخذ من الفسائل الأم. تُفصل الفسائل في فصل الشتاء عندما يكون للنخلة أقل نشاط فيزيولوجي. الفسائل التي يبلغ عمرها سنتين فأكثر، والتي تزن حوالي 20 إلى 25 كيلوجرامًا وتبلغ ارتفاعها 1.5 متر، هي الأفضل للفصل.
بعد نقل الفسيلة إلى المختبر، تزال الأجزاء الزائدة مثل الفروع، ويتم قطع قاعدة الفسيلة بعناية وفصلها. يجب أن يتبقى حوالي 50 سم من الفسيلة. ثم يتم قطع الساق حتى الوصول إلى نسيج أبيض ناعم. يجب التأكد من أن الساق يحتفظ بقاعدة متخشبة. في النهاية، يجب أن يكون لديك عينة صغيرة بطول 6 إلى 8 سم وعرض 3 إلى 4 سم.
المرحلة الثانية: تطهير العينة Disinfection
يتم وضع العينة الصغيرة ذات القاعدة المتخشبة في محلول مضاد للأكسدة يحتوي على 150 ملجم/لتر من حمض الستريك و 100 ملجم/لتر من حمض الأسكوربيك. تتمثل إحدى الوظائف الرئيسية لهذا المحلول في الحفاظ على العينة حتى وقت الزراعة وحمايتها من الاسمرار (ظاهرة الفينول).
في الخطوة التالية، يتم تعقيم طرف العينة لمدة 20 دقيقة باستخدام محلول فطريات مثل مانكوزيب، ثم شطفها ثلاث مرات بالماء المقطر المعقم. ثم يتم غمر العينة في محلول هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 9% (NaOCl) مع بضع قطرات من توين 20 لمدة 5 دقائق تحت التفريغ، ثم لمدة 20 دقيقة تحت الضغط العادي.
المرحلة الثالثة: الملقحة Initiation
يتكون الوسط الزراعي الأولي من وسط MS العادي الذي يحتوي على كمية قليلة من أيون الأمونيوم مع منظمات النمو (الهرمونات النباتية) بتركيز 0.1 إلى 0.3 ملجم/لتر. تأكد من ضبط درجة حموضة الوسط الزراعي على 5.7 قبل إضافة الأجار وتعقيمه بالبخار. بعد تحضير الوسط الزراعي، يتم إخراج العينة من المحلول في بيئة تدفق الهواء اللاميناري ووضعها مباشرة في الوسط الزراعي دون غسلها.
بعد الزراعة، تبدأ مرحلة التلقيح، حيث يجب أن تبقى العينات في غرفة نمو مظلمة لمدة 3 إلى 4 أسابيع. بعد ذلك، وفقًا لنجاح التلقيح، توضع العينات في فترة ضوئية تبلغ 16 ساعة.
المرحلة الرابعة: التكاثر Multiplication
الوسط الزراعي في هذه المرحلة مشابه للمرحلة الثالثة، لكن الاختلاف الرئيسي يكمن في الهرمونات وتركيزاتها. في هذه المرحلة، نستخدم هرمونات مثل BA، NAANOA، IAA، و Kinetin بتركيزات تتراوح من 0.5 إلى 5 ملجم/لتر. العمل الأهم في هذه المرحلة هو فصل النباتيات المتطورة عن البراعم الأخرى، لأن النباتيات النامية تمنع نمو البراعم المحتملة الأخرى.
المرحلة الخامسة: تجذير واستطالة الجذور Rooting and Elongation
بعد مرور الوقت الكافي الذي يعتمد على نوع نخيل التمر، والذي قد يستغرق من عدة أسابيع إلى عدة أشهر، تُنقل النباتيات التي تطورت بشكل أفضل إلى وسط تجذير. يشمل وسط التجذير المقترح لنخيل التمر وسط MS مع:
- NAA بتركيز 1 mg/l
- BAP بتركيز 0.5 mg/l
- Kinetin بتركيز 0.5 mg/l
- GA3 بتركيز 0.5 mg/l
أظهرت الدراسات أن هرمون NAA يُظهر كفاءة وأداء أفضل مقارنة بهرمونات IBA و IAA في تجذير نخيل التمر. يجب أن تبقى العينات في هذا الوسط لمدة تتراوح بين 10 إلى 15 يومًا. بعد هذه الفترة، وبناءً على نوع نخيل التمر ومستوى التطور، تُنقل العينات إلى وسط زراعي مشابه بتركيزات مختلفة من منظمات النمو.
المرحلة السادسة: التأقلم Acclimatization
للتحقق من جاهزية النباتيات للانتقال إلى مرحلة التأقلم، يجب مراعاة النقاط التالية:
- يجب أن تكون للنباتيات ورقتان إلى ثلاث أوراق كبيرة وصحية بدون تجعد.
- يجب أن يكون طول الساق حوالي 1 إلى 10 سم من القاعدة إلى الأوراق.
- يجب أن يكون لقاعدة الساق شكل تاجي-كمثري.
- يجب أن يكون نظام الجذور بطول لا يقل عن 5 سم.
إذا كانت النباتية تحتوي على جميع الميزات المذكورة، فهي جاهزة للتأقلم. الخطوة الأولى لبدء مرحلة التأقلم هي غسل الجذور بالماء المقطر لإزالة الأجار والوسط الزراعي العالق بالجذور، ثم يتم تعقيم النباتيات باستخدام محلول فطريات بنسبة 0.5٪ بنلات. في النهاية، يجب زرع النباتيات في وسط تجذير مناسب مثل بيتموس وكوكوبت والحفاظ على رطوبة مناسبة داخل الدفيئة.
النص الذي قرأته ليس تعليمات كاملة لزراعة الأنسجة لنخيل التمر، بل هو شرح عام للمبادئ. لذا، فإن هذه التوضيحات ليست كافية لبدء الإنتاج.
شتلات نخيل التمر من نوع مجول وبرحي هي الأكثر إنتاجًا بين الأنواع المختلفة من نخيل التمر على مستوى العالم. في السنوات الأخيرة، وبسبب الشعبية العالية لمجول زراعة الأنسجة، نشهد توزيع وبيع شتلات مزيفة في البلاد. لذا، نطلب من المشترين الكرام شراء شتلات زراعة الأنسجة لنخيل التمر فقط من مراكز بيع وإنتاج موثوقة.
